体外诊断产业技术创新战略联盟

简报

中东呼吸综合征（MERS）专刊

二〇一四年

第一期

（总第12期）

提 要

1、本次MERS疫情概况

2、联盟MERS诊断研究情况

一、本次MERS疫情概况

自5月20日韩国确诊首例中东呼吸综合征（MERS）患者开始，至6月26日韩国已有181人确诊MERS，死亡病例增至31人。韩国的MERS疫情何时能够最终控制目前尚不明朗。与此同时，阿联酋、泰国、德国、斯洛伐克等国家亦出现MERS患者死亡或输入性病例。5月29日，国家卫生计生委正式确诊我国首例输入性MERS病例，为韩国一名MERS患者的密切接触者。6月10日，我国66名该患者的密切接触者最终全部解除隔离。6月26日，输入我国的韩籍MERS患者在隔离治疗半个月后出院。至此，我国成功应对了首例MERS输入性病例。但是由于韩国在地理位置上与我国邻近，且两国人员往来频繁，韩国的MERS疫情极大地增加了我国出现MERS疫情的风险。因此，密切关注韩国的MERS疫情动态，制定应急预案，提前储备相关防治技术变得极为必要。

二、联盟MERS诊断研究情况

在2012年全球首例MERS病例在沙特阿拉伯出现后，就有联盟单位在自主开展MERS诊断试剂的研制。此次韩国MERS疫情暴发之初，联盟成员单位响应科技部、国家卫生计生委的号召，积极承担传染病防控的社会责任，继续开展MERS相关诊断技术攻关和试剂储备。因此，我国在出现首例输入性MERS病例时便能自主实现MERS的有效诊断。

目前，已有8个联盟成员单位完成了诊断试剂的研制，其中有7个核酸诊断试剂，2个免疫诊断试剂。目前各单位均做好了试剂量产的准备。诊断相关的基础性研究工作目前也在开展中。

1、核酸诊断试剂情况

中山大学达安基因股份有限公司中山大学达安基因股份有限公司在2012年就成功研制出“中东呼吸综合征冠状病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）”。该试剂盒通过一步法实时荧光PCR体系扩增对MERS病毒进行定性检测，分析灵敏度为1.0×10³copies/ml；与感染部位相同或感染症状相似的其他病原体（流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒等）无交叉反应，特异性良好。样本适用范围广，鼻咽拭子、血清及尿液均可作为样本来源。该产品全年均有生产和销售，自研发成功以来，已经销往全国各地的疾控中心达13000余人份，销售额达到60余万元。

上海之江生物科技股份有限公司研制的“中东呼吸综合征冠状病毒核酸测定试剂盒（荧光PCR法）”针对MERS病毒特异性核酸片段进行选择性扩增，从样本提取到获得结果只需2.5小时，产品采用的引物探针序列是世界卫生组织和美国疾病预防控制中心推荐的。该试剂已在广东省疾病预防控制中心通过验证，并销往马来西亚、苏丹、土耳其等国家，国内多家疾病预防控制中心、出入境检验检疫局、国际旅行保健中心等实验室已有应急储备。

北京金豪制药股份有限公司在2014年11月研制出“中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）RNA检测试剂盒（荧光PCR法）”。该试剂用于对多种样本（鼻、咽拭子以及痰、气管吸出物）中的MERS病毒RNA进行定性检测，以及MERS病毒感染的辅助诊断及流行病学监控。目前，该试剂盒已作为储备试剂销售至国内疾控系统。

军事医学科学院放射与辐射医学研究所基于自有复合探针专利技术，研制出“新型冠状病毒（MERS-CoV）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）”。目前已完成试剂盒组装，可应急配发各疾控中心进行使用。该试剂盒可在2-3小时内完成MERS病毒的检测。此外，实验室正在加紧进行相关注册申报材料的准备，拟于近期提交总后卫生部进行注册申报。

上海科华生物工程股份有限公司研制的“中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）”可同时对MERS病毒三处特异基因靶标进行三色荧光PCR检测，约两小时完成检测，能满足MERS病毒病原学相关的最新检测标准，有助于疫情监测、流行病学调查等。

泰普生物科学（中国）有限公司针对此次MERS疫情已启动了“中东呼吸综合征病毒（MERS-CoV）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）”的紧急量产工作。该试剂盒将第一时间走进疫情防控部门，为疑似病例的及时、有效检测工作提供保障。该试剂通过检测MERS病毒的upE、N、ORF1A三个基因实现检测。

湖南圣湘生物科技有限公司在我国出现首例MERS病例后第一时间研发了“中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）”。该试剂根据我国中东呼吸综合征病例诊疗方案（2014年版）和WHO官方推荐区域采用了双靶标基因检测，同时采用内标监控核酸提取及PCR扩增以最大程度上保证结果的可靠性。

2、免疫诊断试剂情况

厦门大学在2014年底研制出MERS病毒核蛋白的免疫断试剂（酶联免疫法）。经香港大学新发传染病国家重点实验室证实是一种可有效检测MERS病毒的试剂，检测耗时90分钟。该试剂对MERS病毒核蛋白的检测灵敏度达到1ng的水平，对MERS培养病毒的检测灵敏度可达10 TCID50，对四种人类冠状病毒（HCoV-HKU1、HCoV-OC43、HCoV-229E和HCoV-NL63）和甲乙丙型流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、1-4型副流感病毒、人类鼻病毒、人类偏肺病毒等多种人类呼吸道病毒均无非特异性反应。相关研究结果发表于《新发微生物和感染》（Emerging Microbes & Infections），并于6月17日获得Nature主页在“最新研究”（Latest research）栏目的头条链接。目前该试剂已做好规模化生产的准备。

厦门大学于5月底韩国暴发MERS疫情后，紧急启动MERS快速诊断试剂的研制。在前期研制的MERS免疫诊断试剂（酶联免疫法）基础上，研制出的MERS快速诊断试剂（乳胶免疫层析法）。该方法与酶联免疫法相比，操作更快更简便，无需仪器设备， 15分钟即可现场判定结果。目前初步建立的MERS快速诊断试剂雏形已基本可以工作。用MERS核蛋白对新研制的MERS快速试剂和前期研制的MERS酶联免疫试剂进行平行比较分析，显示两个试剂盒的检测灵敏度相当，对重组核蛋白抗原的检测下限均可达40pg水平，同时用人类冠状病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒和正常人鼻咽拭子采集液对新研制的MERS快速试剂进行特异性评价，结果均未出现非特异性反应，为开展后续的试剂工艺优化和全面的性能评估奠定了基础。

广州万孚生物技术股份有限公司在我国出现MERS输入性病例后，迅速组织了MERS检测产品研发小组，启动了公司的应急快速集成反应能力，开展MERS免疫层析快速检测试剂应急研发工作，并在全球范围内搜集资源，以期在最快时间内研制出MERS免疫学快速检测试剂。

3、其他诊断研究进展

中国疾病预防控制中心病毒病所和广东省及惠州市疾控中心密切合作，于6月3日利用高通量测序技术完成了我国首例输入性病例的MERS病毒全基因组序列测定，并于当天将序列数据上传至GenBank数据库。序列分析结果表明，该病毒与当前中东地区MERS病毒流行株高度同源。根据遗传学相关分析，初步推测该毒株可能最终来源于沙特阿拉伯。该病毒的S蛋白编码基因与GenBank上已有的86条全基因组核苷酸同源性为98.9%-99.6%，与约旦分离株NC_019843.3的核苷酸同源性为99.5%，但与病毒感染有关的受体结合区没有发现突变，其他结构蛋白基因与附属蛋白基因也高度保守。目前尚未发现与病毒传染性增强相关的明显证据，对于病毒基因组上少量的基因变异和重组的生物学意义正在进一步分析。

卫生部临检中心目前正在积极制备MERS-CoV核酸质控品和标准品，使其可用于MERS-CoV检测试剂盒的评价，保证试剂研发的质量和检测应用的有效性，最终为MERS疫情的准确诊断和有效控制提供及时、准确、有效的实验室检测结果。卫生部临床检验中心牵头承担了“特殊传染病诊断试剂企业研发/产品评价用参考品的研制”课题，主要任务是建立特殊病毒（埃博拉、马尔堡、拉沙热、克里米亚-刚果出血热、利夫特谷热、基孔肯雅病毒等）的核酸和抗原相关检测试剂的核酸样本盘或抗原样本盘，并对样本盘进行评价。<对样本盘进行评价。

（联盟秘书处综合）

主题词：埃博拉 登革热 体外诊断联盟 简报

报送：科技部：社发司、政法司、计划司、创新办；

国家卫生计生委：医政司、疾病预防控制局、科教司；

教育部：科学技术司；

发改委：经济运行调节局；

国家质量监督检验检疫总局：科技司；

国家食品药品监督管理局：医疗器械监管司；

中国人民解放军总后勤部卫生部：科训局；

中国生物技术发展中心；

国家科技基础条件平台中心；

中国疾病预防控制中心；

联盟专家委员会：主任委员、副主任委员；

联盟成员单位属地科技、卫生主管部门；

各联盟成员单位。

撰稿：体外诊断产业技术创新战略联盟 秘书处

编辑：葛胜祥、方木锦、欧明展

日期：2014年10月28日

单位：体外诊断产业技术创新战略联盟 秘书处

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